Ｅ．PCR法による各エクソンの増幅：
PAI-1遺伝子のイントロン／エクソン接合部を含む全エクソン領域とともに5'近接領域を含めて検索するために、PCRプライマーを表1に示すように設計した。PCR反応は、Ex Taq DNAポリメラーゼまたはAmpli Tag GOLD（宝酒造、京都）を用いて、94℃-20秒〜1分（変性反応）、57〜63℃-1分（アニーリング反応）、72℃-0〜1分（伸長反応）で30サイクルの増幅反応を行った。PCR増幅物は、1.5％アガロースゲルで電気泳動後、エチジウムブロマイドで染色した。
Ｆ．PAI-1遺伝子の塩基配列の解析：
Genomic DNAのPCR産物をpCR2.1クローニングベクター（Invitrogen，Netherland）ヘクローニングの後、PAI-1遺伝子の塩基配列を蛍光標識プライマーとオートシークェンサー（ABI-パーキンェルマージャパン，model 373A）を用いたサイクルシークエンス法により決定した。さらに変異部位は、2種のプライマーの量を50：1として行った非対称PCR法により得られた1本鎖DNAを、35-S dATPとSequcnasc（Amersham，Buckinghamshire，UK）によるダイデオキシターミネーター法を用いた直接塩基配列決定法（direct sequcncingmethod）により解析した。
?． 結 果
Ａ．PAI-1抗原量の測定：
発端者の血漿中PAI-1抗原量は3.0ng/ml未満（正常値20-30ng/ml）および血清中のPAI-1抗原量は56.8ng/ml（正常値200-300ng/ml）といずれも著明に低下していた（図1）。家系内の有症状者のPAI-1抗原量も血漿中、血清中ともに低値であり、特に血漿中の抗原量がより低下していた。このことから、本家系でみられる後出血を主症状とする出血傾向が、PAI-1の欠乏に起因することが明らかとなった。
Ｂ．Genomic DNAのサザンプロット法による解析：
PAI-1遺伝子の欠失、挿入を有無を検索するため、正常者および発端者（図1、?-2）のGcnomic DNAを制限酵素EooRIを用いて消化後、32P-dCTP標識PAI-1cDNAをプローブとしてサザンプロット法による解析を行った。発端者では、正常者と同様に7.OKbpと1.7Kbpの2本のバンドがみられ、制限酵素多型に相違はみられなかった（図2）。すなわち、発端者のPAI-1遺伝子には大きな欠失および挿入はないものと考えられた。
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