S9はオリエンタル酵母（株）より購入し（製造日：1996，4，12、ロット番号196041200）、使用時迄-80℃の超低温冷凍庫に保存した。また、S9mix用のCofaclorはオリエンタル酵母（株）のCofactor-1（ロット番号1999601）を購入し、使用時迄冷蔵庫の冷凍室に保存した。
2．6 培地
前培養用としてニュートリェンドブロスNo.2（Oxoid杜、ロット番号：10956082）を、また、試験用の最少グルコース寒天平板培地として寒天（和光純薬工業（株））を使用した。
3． 試験方法
3．1 試験の準備
3．1．1 被験液の調製
滅菌試料瓶に被験物質（Acid Red52）250mgを電子分析天秤で測定して入れ精製水で溶解した後、滅菌済み5mgメスフラスコにマイクロピペットで移し、メスアップして被験液5mg（5mg/100μl精製水）を作製した。
各試験とも被験液は用時調製した。
（1）濃度設定試験用
直接法、代謝活性化法とも、下記の10濃度の被験液（単位1mg/100μl精製水）を調製し、陰性対照は精製水とした。
5.0，2.5，1.25，0.625，0.313，0.156，0.078，0.039，0.0195，0.0098
（2）本試験用
濃度設定試験結果をもとに、各試験菌株の直接法、代謝活性化法とも、下記の6濃度（単位1mg/100μl精製水）を調製した。
5.0，2.5，1.25，0.625，0.313，0.156
3．1．2 陽性対照物質の濃度
