S9はオリエンタル酵母（株）より購入し（製造日1996.4.12、ロット番号：96041200）、使用時迄-80℃の超低温冷凍庫に保存した。また、S9mix用のCofaclorはオリエンタル酵母（株）のCofactoｒ-1（ロット番号：999601）を購入し、使用時迄冷蔵庫の冷凍室に保存した。
2．6 培地
前培養用としてニュートリェントフロスNo．2（Oxoid社、ロット番号：10956082）を、また、試験用の最少グルコース寒天平板培地として寒天（和光純薬工業（沸）を使用した。
3． 試験方法
3．1 試験の準備
3．1．1 被験液の調製
滅菌試料瓶に被験物質（AcidB1ue9）250mgを電子分析天秤で測定して入れ、精製水で、溶解した後、滅菌済み5mlメスフラスコにマイクロピペットで移し、メスアップして被験液5ml（5ml/100μｌ精製水）を作製した。
各試験とも被験液は用時調製した。
（1)濃度設定試験用
直接法、代謝活性化法とも、下記の10濃度の被験液（単位：mg/100μｌ精製水）を調製し、陰性対照は精製水とした。
5.0、1.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0078、0.039、0.0195、0.0098
（2)本試験用濃度
設定試験結果をもとに、各試験菌株の直接法、代謝活性化法とも、下記の6濃度（単位：mg/1OOμ精製水）を調製した。
5.0、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156
3．1．2 陽性対照物質の濃度
濃度設定試験および本試験に使用する陽性対照物質の種類と濃度（単位：10-3mg/100μｌ精製水、10-3mg/プレート）を下記に示す。
菌株 TA100 TA1535 TA98 TA1537 WP2uvrA
直接法 AF2(0.01) AZI（0.5） A刷（0.1） 9AA（80.0） AF2（0.01）
代謝活性化法 BaP(5.0） 2AA（2.0） BaP(5.0) Bap（5.0） 2AA（10.0）
3．1．3 最少グルコース寒天平板培地の作製
Vogel−BomerE最少培地（ソルト）100ml、グルコース20g、寒天15gにそれぞれ精製水を100ml、100ml、700ml入れ滅菌する。滅菌後、混合して最少グルコース寒天培地1000
